W ostatnich latach zanieczyszczenia nitrozoaminami w farmaceutykach stały się przedmiotem intensywnej kontroli regulacyjnej. Dotyczy to szczególnie zanieczyszczeń związanych z substancjami czynnymi nitrozoamin (NDSRI), które są traktowane jako zanieczyszczenia budzące obawy, niezależnie od przewidywanego potencjału mutagennego. Nowe badania naukowe dostarczają istotnych informacji na temat N-nitroso-hydrochlorotiazydu (NO-HCTZ), wykazując, że substancja ta nie jest mutagenna, a jej wcześniejsze wyniki testów mutagenności były wynikiem obecności formaldehydu.
Hydrochlorotiazyd i jego zanieczyszczenia
Hydrochlorotiazyd (HCTZ) to diuretyk stosowany od 1959 roku w leczeniu nadciśnienia tętniczego i obrzęków. Jest jednym z najczęściej przepisywanych leków przeciwnadciśnieniowych, stosowanym zarówno samodzielnie, jak i w połączeniu z innymi substancjami czynnymi. Obawy dotyczące N-nitroso-hydrochlorotiazydu (NO-HCTZ), który może powstawać w wyniku nitrozowania HCTZ, skłoniły naukowców do przeprowadzenia szczegółowych badań nad jego właściwościami mutagennymi.
Badania nad mutagennością NO-HCTZ
W badaniach nad NO-HCTZ stosowano test Amesa, który wykazał pozytywną odpowiedź mutagenną. Jednakże, wyniki te były nieoczekiwane, ponieważ NO-HCTZ jest niestabilny w warunkach testu, co prowadzi do powstawania formaldehydu, który jest znanym mutagenem. W celu dokładniejszej oceny, opracowano zmodyfikowany system testu Amesa z dodatkiem glutationu, który skutecznie usuwa formaldehyd z mieszaniny reakcyjnej.
Wyniki analizy formaldehydu i S-(hydroksymetylo)glutationu
Wyniki badań wykazały, że formaldehyd uwalniany z NO-HCTZ jest głównym czynnikiem odpowiedzialnym za obserwowaną mutagenność. Dodanie glutationu prowadzi do powstania S-(hydroksymetylo)glutationu, co skutecznie obniża poziom wolnego formaldehydu. To odkrycie pozwoliło na znaczne zmniejszenie mutagennej odpowiedzi NO-HCTZ w zmodyfikowanym systemie testu Amesa.
Profil mutagenności NO-HCTZ zgodny z formaldehydem
Testy wykazały, że profil mutagenności NO-HCTZ jest zgodny z profilem formaldehydu, a nie z samym NO-HCTZ. W oryginalnym systemie testu Amesa NO-HCTZ wykazywał pozytywne odpowiedzi w kilku szczepach bakterii, jednak w zmodyfikowanym systemie z dodatkiem glutationu odpowiedź mutagenna została znacznie zmniejszona.
Rozwój zmodyfikowanego systemu testu Amesa
Zastosowanie zmodyfikowanego systemu testu Amesa z dodatkiem glutationu pozwoliło na skuteczne zneutralizowanie wpływu formaldehydu na wyniki testu. Dzięki temu możliwe było dokładniejsze zbadanie rzeczywistego wpływu NO-HCTZ na mutagenność, co potwierdziło brak mutagenności tej substancji.
Podsumowanie i wnioski
Przeprowadzone badania jednoznacznie wskazują, że pozytywne wyniki testu Amesa dla NO-HCTZ były wynikiem obecności formaldehydu, a nie samej substancji. Wprowadzenie zmodyfikowanego systemu testu Amesa z dodatkiem glutationu pozwoliło na dokładniejsze zbadanie mutagenności NO-HCTZ, co przyczyniło się do uznania tej substancji za niemutagenną przez niektóre organy regulacyjne, takie jak EMA i Health Canada. Wyniki te sugerują, że inne organy regulacyjne powinny rozważyć zmianę swojego stanowiska w świetle przedstawionych danych.
Bibliografia
Gandhi R. D., Hickert S., Hoevelmann Y., Mee C. D., Schlingemann J., Adams A., Blanazs A., Simon S., Elloway J., Rigger L., Teasdale A., Beaumont C. V., Wright L. and Doherty A.. Escaping the cohort of concern: in vitro experimental evidence supports non-mutagenicity of
